Sección: 16º symposium internacional sobre la problemática actual de las resistencias en cultivos mediterráneos
Abstract: El plan de actuación que se viene realizando en áreas citrícolas de la Comunidad Valenciana contra la mosca mediterránea de la fruta, Ceratitis capitata, se basa en una red de monitorización de las poblaciones y el control de la plaga mediante pulverización-cebo en bandas, utilizando malatión como materia activa. Para detectar la posible aparición de poblaciones resistentes hemos determinado la susceptibilidad frente a malatión de poblaciones de campo sometidas a distinta intensidad de tratamiento durante los últimos años. Nuestros resultados ponen puesto de manifiesto una mayor resistencia en poblaciones procedentes de la Comunidad Valenciana. Asimismo, hemos iniciado el estudio de los mecanismos de resistencia con el objeto de desarrollar técnicas bioquímicas o moleculares de detección precoz, que nos permitan disponer de las bases científicas para orientar la decisión de tratamiento en campo y la selección del insecticida más adecuado.
Los ataques de la mosca mediterránea de la fruta, Ceratitis capitata (Wiedemann), han generado un incremento significativo de las pérdidas directas en los últimos años a pesar de las actividades permanentes de control. Su incidencia se ha agravado como consecuencia de la expansión del cultivo de variedades extratempranas en cítricos, extremadamente sensibles al ataque de este insecto. A éstas hay que sumar las cuantiosas pérdidas derivadas de la imposición de periodos de cuarentena por parte de países importadores de cítricos. El plan de actuación elaborado por la Conselleria de Agricultura, Pesca y Alimentación de la Comunidad Valenciana contra la mosca de la fruta se basa en una red de monitorización de las poblaciones a lo largo de todo el año y el control de la plaga mediante tratamientos aéreos y terrestres (PRIMO-MILLO et al., 2003).
Los tratamientos aéreos se realizan mediante pulverización-cebo en bandas, utilizando malatión 50LE como materia activa y proteínas hidrolizadas como atrayentes, siendo frecuente efectuar varias aplicaciones durante el periodo de maduración de los frutos. En aquellos casos en que por circunstancias climáticas o fisiológicas se produzca caída de fruta, está contemplado el reparto gratuito de Diazinon 60% p/v EC para realizar aplicaciones dirigidas al suelo. Los tratamientos con malatión-cebo conllevan riesgos sobre el medio ambiente y la salud pública, debido al aumento de los residuos y a la proximidad urbana de algunas zonas de cultivo en el área mediterránea. En este sentido, es necesario ir substituyendo de forma progresiva los tratamientos intensivos con malatión por insecticidas con mejores propiedades ecotoxicológicas (CASTAÑERA, 2003). Uno de los candidatos postulados es el Spintor Cebo, una formulación basada en Spinosad y un cebo optimizado, ha obtenido un registro excepcional para el control de C. capitata en cítricos y a sido incluida en el protocolo con APHIS-USDA para la exportación de cítricos a Estados Unidos (VERGOULAS Y TORNÉ, 2003).
Los tratamientos intensivos con malatión que se vienen realizando en los últimos años sobre las principales áreas citrícolas de la Comunidad Valenciana, aumentan la probabilidad de aparición de poblaciones resistentes. Estudios realizados a finales de los 90 no detectaron resistencia a malatión y diazinón en poblaciones de C. capitata recogidas tanto en frutales como en cítricos de diferentes regiones españolas (VIÑUELA, 1997). Sin embargo, este estudio es anterior al plan de actuación contra C. capitata puesto en práctica en las cuatro últimas campañas.
Además, el potencial de C. capitata para desarrollar resistencia a malatión ha sido demostrado mediante selección en laboratorio (KOREN et al., 1984). Es por tanto necesario conocer la situación actual de los niveles de susceptibilidad al malatión y a otros insecticidas que se han utilizado (fentión) o son potencialmente utilizables (spinosad) en poblaciones españolas de la mosca mediterránea de la fruta con el objeto de optimizar el uso de insecticidas en el manejo integrado de esta plaga.
Evaluación de la susceptibilidad a insecticidas
Se ha procedido a la recogida de fruta infectada con larvas de C. capitata procedente de diferentes zonas geográficas: Burriana, Castellón, Alcudia, Carlet, Gerona y La Rioja. Para la recogida de muestras se contó con la colaboración de los Drs. Adriana Escudero (IRTA, Gerona), Rafael Argiles (TRAGSA, Valencia), Vicente Navarro (Universidad Politécnica de Valencia, Valencia), y Vicente Marco (Universidad de la Rioja, La Rioja). Además, se han evaluado dos poblaciones de laboratorio: una mantenida durante más de 20 años en el INIA y la otra con tres años en el IVIA y procedente de poblaciones de campo recogidas en Valencia hace cuatro años en una zona no tratada.
Se ha evaluado la toxicidad por ingestión frente a adultos de C. capitata de los siguientes insecticidas: Malafin 50 EC (Agrodan S.A.), Lebaycid 50 LE (Bayer CropScience S.L.) y Spintor Cebo (Dow AgroSciences). En los bioensayos se utilizan adultos de 5-7 días de edad, obtenidos a partir de los frutos infectados recogidos en el campo. En cada ensayo, se utilizan 5-7 tratamientos y cuatro repeticiones de 10-20 individuos cada una. La mortalidad se evalúa a las 48h y los valores obtenidos son analizados mediante análisis Probit para el cálculo de las concentraciones letales. Hasta la fecha, se ha determinado la susceptibilidad de las dos poblaciones de laboratorio y de 6 poblaciones de campo.
Nuestros resultados indican que las poblaciones procedentes de la Comunidad Valenciana son 2-6 veces más tolerantes al Malafin (malatión) que las poblaciones procedentes de Gerona y La Rioja, y unas 100 veces más tolerantes cuando se las compara frente a las poblaciones de laboratorio. Asimismo, al estudiar la posible resistencia cruzada frente a otros insecticidas, la población de Castellón resulta 10 veces más tolerante frente al Lebaycid (fentión) y no presenta diferencias en su susceptibilidad frente al Spintor Cebo (spinosad), al compararla frente a las poblaciones de laboratorio.
Bases bioquímicas y moleculares de la resistencia a malatión
Hemos iniciado el estudio de los mecanismos de resistencia en las poblaciones de campo de C. capitata que han resultado ser resistentes a malatión. Los principales sistemas enzimáticos implicados en resistencia a insecticidas son bien conocidos en dípteros (RANSON et al., 2002). La resistencia a insecticidas está en muchos casos asociada a un aumento en la actividad de los sistemas metabólicos de destoxificación Resistencia metabólica incluye esterasas, glutatión S-transferasas y citocromo P450s mono-oxigenasas como las principales enzimas de destoxificación para una gran variedad de insecticidas, incluyendo malatión (COTO et al., 2000; LEE Y LEES, 2001; KOSTAROPOULOS et al., 2001). Sin embargo, apenas se tiene información sobre su implicación directa en resistencia en C. capitata (YAWETZ AND KOREN, 1984; MEGIAS et al., 1986; DANIELSON et al., 1999). Mediante el uso de sinergistas (S,S,S,tributil fosforotritioato (DEF), inhibidor de esterasas, y piperonil butoxido (PBO), inhibidor de mono-oxigenasas, hemos podido demostrar el papel de las esterasas en la resistencia de nuestras poblaciones de C. capitata frente a malatión. Asimismo, con el propósito de establecer la relación entre las actividades enzimáticas de destoxificación en esta especie y los niveles de resistencia, analizamos una población susceptible de laboratorio y una de las poblaciones de campo con mayor tolerancia frente a malatión. Los resultados obtenidos no muestran diferencias para ninguna de las actividades enzimáticas, lo que sugiere que el mecanismo de resistencia no se debe a una sobre-expresión de estas enzimas.
La resistencia a insecticidas organofosforados también puede deberse a modificaciones de la enzima que actúa como molécula diana de estos insecticidas, la acetil colinesterasa (MUTERO et al., 1994; WALSH et al., 2001); o a cambios en la función en una familia de enzimas metabólicas, las aliesterasas (NEWCOMB et al., 1997). Hemos podido comprobar que la actividad acetil colinesterasa en insectos resistentes es insensible al malaoxon (forma activada del malatión) en al menos el 50% de los individuos de la población resistente de C. capitata, mientras que en la población susceptible la inhibición ocurre en todos los individuos.
Asimismo, la actividad aliesterasa de todos los individuos de la población resistente está modificada, advirtiéndose un aumento en la tolerancia frente a malaoxon y una reducción en su habilidad de hidrolizar carboxil-ésteres. Por el contrario, la modificación de la actividad aliesterasa sólo está presente en menos del 50% de los individuos de la población susceptible. Actualmente, se está procediendo a establecer la secuencia de los genes de la aliesterasa y acetil colinesterasasa en insectos susceptibles y resistentes en busca de las mutaciones que expliquen la resistencia encontrada.
Conclusiones
Mediante la realización de bioensayos se ha puesto de manifiesto una mayor resistencia al malatión en poblaciones de C. capitata procedentes de la Comunidad Valenciana. Un conocimiento detallado a nivel bioquímico y molecular de los mecanismos de resistencia permitirá el desarrollo de métodos de detección temprana de resistencia en poblaciones naturales. Estos métodos tienen la ventaja de poder detectar individuos resistentes sin necesidad de disponer de facilidades para la cría y sin tener que realizar bioensayos.
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