Se llevaron a término cuatro ensayos, en plantaciones comerciales, sobre cuatro variedades diferentes de manzano para la determinación de los niveles de residuos y la curva de disipación de NAD y ANA. Las aplicaciones se llevaron a cabo al inicio de la caída de pétalos para el caso del NAD y con tamaños de fruto entre 9 -12 mm para el caso del ANA. Las curvas de degradación encontradas fueron, en ambos casos, coherentes con los patrones habituales, si bien, hubo diferencias en los niveles encontrados entre variedades. El método analítico empleado permitió la detección a niveles de 10-9, es decir, ppb o ng/g. Los niveles detectados fueron bajos durante el estudio, disipándose estos totalmente a los 61 días para el caso del NAD y para los 21 en el caso del ANA. A lo largo del estudio también se puso de manifiesto la relación existente entre el tamaño de los frutos muestreados y los contenidos de residuos hallados.
INTRODUCCIÓN
Hoy en día la necesidad de aclareo de flores o frutos jóvenes es indiscutible dentro de la mayoría de especies frutícolas de importancia económica con el objetivo de regular la carga de frutos para obtener la máxima calidad a las cosechas y rentabilizar la producción. Dentro de las diferentes alternativas existentes, manual, mecánica y química, la aplicación de fitoreguladores es la técnica normalmente utilizada en manzano y, por tanto, la más ampliamente difundida.
Entre las materias técnicas disponibles para el aclareo químico el ANA (ácido naftilacético) y el NAD (sal amida del ácido naftilacético) han sido, desde sus inicios, dos materias técnicas clave en esta especie.
El ANA se utiliza en aclareo desde los años cuarenta del pasado siglo, preconizándose su uso en floración (BURKHOLDER y MCCOWN 1941), y no fue hasta 1945 cuando se demostró su eficacia y seguridad cuando era aplicado en postfloración (DAVIDSON et al., 1945), quedando desde entonces posicionadas las aplicaciones de dicha materia técnica en este período.
Actualmente, la extensa experimentación existente permite utilizar, tanto el ANA como el NAD, en función de la respuesta varietal, generalmente en algún momento del crecimiento del fruto en el intervalo comprendido entre los 9 y los 12mm de diámetro del fruto central del corimbo, estadio que acontece aproximadamente entre los 15 y 20 días después de floración.
En el caso de la ANA amida, su efecto como materia para el aclareo de frutos fue demostrado en la misma época que el ANA (BURKHOLDER y MCCOWN, 1941; SCHENEIDER y ENZIE 1944). Las ventajas del ANA amida con respecto al ANA se basaron en el hecho de ser menos efectivaque el ANA y se consideraba un producto más seguro para usar en posibles situaciones de sobreaclareo (HOFMANN, 1953 y HOFMANN etal. 1953).
A pesar de todo, hay una importante variación en la eficacia de unos años a otros (ROBINSON y LASKO, 2004), siendo esta variabilidad atribuida a una interacción compleja de factores ambientales y propios del árbol (BATJER et al.,1968; BYERS, 2002; BYERS y CARBAUGH, 2002; FORSHEY, 1986; STOVER et al. 2001; WILLIAMS y EDGERTON, 1981).
También influye en la eficacia las condiciones ambientales en el momento del tratamiento, siendo así que en las aplicaciones se debe tener muy en cuenta lo que a temperatura y radiación solar se refiere, evitando las horas del dia con alta temperatura y radiación solar realizándose los tratamientos a primeras horas de la mañana o durante las horas finales de la tarde, con temperaturas que oscilen entre los 15-25OC y altahumedad relativa ( 80-90%). Este hecho es de especial relevancia y es uno de los condicionantes más importantes en el uso de esta materia técnica ya que las soluciones salinas del ANA son destruidas por la luz solar o ultravioleta.
Ha sido bastante estudiado el ANA que aplicado antes de la polinización interfiere la fecundación por reducir el crecimiento del tubo polínico; aplicado después de caída los pétalos el modo de acción es distinto y de hecho la caída del fruto cuajado se retrasa unos días para acelerarse después; el retardo se debe al "efecto auxínico" del ANA y la caída acelerada se relaciona con el modo de actuar de la auxina y sus símiles los cuales ablandan la membrana , y debido al ablandamiento se produce un crecimiento longitudinal de la célula, que perjudica la formación del endospermo, retarda el crecimiento y se produce la necrosis del embrión (TROMP y WERTHEIM,1980)
La directiva 91/414/CEE, relativa a la comercialización de productos fitosanitarios (y sus posteriores modificaciones), transpuesta en el Estado Español por el Real Decreto 2163/94 (BOE 18.11.94) puso las bases para la inclusión en una Lista Única Comunitaria de las sustancias activas destinadas a la formulación de productos fitosanitarios, con un alto nivel de exigencias toxicológicas y ecotoxicológicas, para minimizar su impacto sobre la salud humana y el medio ambiente. Actualmente ambas materias activas se encuentran e fase de retirada voluntaria y con fecha límite de comercialización 30/06/2011.
Objetivo del estudio
Este estudio tiene por objetivo conocer la dinámica de los residuos de las materias activas Acido naftilacetico (ANA) y naftilacetamida (NAD), utilizadas en plantaciones comerciales para aclareo de frutos, en los frutos de 4 variedades de manzano.
Material y métodos
Localización de los ensayos. Para el estudio de la dinámica de degradación de los residuos de ANA y NAD se han llevado a cabo ensayos sobre 4 variedades diferentes de manzano plantadas en la localidad de Bell·lloc d?Urgell, en la provincia de Lleida. La descripción y características más importantes se detallan a continuación (Tabla 1).
Productos y tesis ensayadas. La aplicación de ANA se llevó a cabo mediante el producto ETIFIX® (ANA 1 % p/v) en forma de concentrado soluble, con titularidad registral de la empresa NUFARM ESPAÑA, S.A. La aplicación de NAD se llevó a cabo mediante el producto AMID THIN (ANA AMIDA 8,4% p/p), con titularidad registral de la empresa AMVAC Chemical LTD.
La naftilacetamida se aplicó el dia 03/04/2009, al inicio de la caída de pétalos, tal y como se prescribe y es habitual en la zona, Por su parte el àcido naftilacetico se aplicó el 04/05/2009 cuando el diámetro del fruto central de los corimbos medía 9-12 mm. de diámetro promedio.
Los dos productos fueron aplicados a las 4 fincas. En este aspecto se destaca que en condiciones de muy buena floración y de cuajado favorables el uso de las dos materias activas de forma secuencial es una recomendación habitual en la zona .
Los productos de ensayo se aplicaron mediante pulverización hidroneumática, con un consumo de caldo de 800 l /ha. La aplicación se realizó de acuerdo con los principios de las buenas prácticas agrícolas y las técnicas vigentes en la zona. El tratamiento proporcionó una buena distribución del producto sobre los árboles de la parcela y aseguró una correcta cobertura de las partes altas del árbol evitando el goteo.
Recolección de muestras, manejo y procedimiento analítico. Se llevaron a cabo 7 muestreos semanales consecutivos en las fechas indicadas en la Tabla 2. Los muestreos se iniciaron el 30/04/2009, en concreto 27 días después de la aplicación de la naftilacetamina y 4 días antes de la aplicación del naftilacético. Ello fue debido a que antes de esta fecha era difícil obtener muestraanalizable por encontrarse la planta en los estados fenológicos G y H, que son los que siguen inmediatamente después de la floración. En estos estadios los frutos son muy pequeños necesitándose, por tanto, cantidades muy elevadas de ellos para tener una muestra representativa.
Además se debe tener en cuenta que buena parte de los frutos se marchitan y caen en durante las sucesivas purgas que acontecen después de la caída de pétalos de forma natural y favorecida por la aplicación de productos para el aclareo químico. Por todo ello se inició la recogida de muestras a partir del momento en que el fruto tenía aproximadamente 10 mm de diámetro.
El proceso de muestreo consistió en la recogida una muestra de frutos en cada parcela y fecha de muestreo; Las muestras recogidas contenían, aproximadamente, 2 kg de frutos tomados en partes alícuotas según las bandas del árbol, así como de los diferentes estratos de altura. Previo al proceso analítico se realizó una separación de muestra en dos submuestras, en una se agrupó a los frutos de mayor tamaño y en otra los de menor tamaño procesándose cada muestra por separado.
Durante la toma de muestras se tomaron en consideración todas las medidas para evitar la contaminación de muestras, y así, para el proceso de recolección se usaron guantes desechables que se iban cambiando para cada muestra, las muestras se guardaron en bolsas de papel?cartón, adecuadas para su conservación, siendo depositadas en un congelador a la temperatura de-18ºC hasta su procesado analítico.
Las determinaciones analíticas de los residuos, tanto de ANA como de NAD, se llevaron a cabo en el Laboratorio del Departamento de Química Analítica de la Universitat de Barcelona según la metodología descrita a continuación.
En total se han procesado un total de 56 muestras.
Resultados y discusión
La Tabla 3 muestra los resultados del análisis de residuos para la naftilacetamida, destacando los bajos niveles de residuos (trazas) de NAD que se encuentran para todas las variedades, en general, y que se disiparon totalmente a partir de los 54 -61 días desde la aplicación según variedades.
La Tabla 4 muestra los resultados del análisis de residuos para ácido naftilacetico, destacando los bajos niveles de residuos (trazas) de ANA que se encuentran para todas las variedades, en general, y que se disipa ron totalmente a partir de los 16 -21 días desde la aplicación según variedades.
En todas las variedades estudiadas el contenido de residuos fue decreciendo con el tiempo hasta su disipación por debajo de los límites de detección (Figura 1), mostrándose una evolución coherente con la dinámica de los procesos de degradación de este tipo de sustancias (Figura 2). Los resultados muestran diferencias entre variedades por lo que se refiere al contenido de residuos (Tabla 5). La detección de residuos de ANA antes de la aplicación del producto (Tabla 4). es justificable por un doble motivo: en primer lugar porque la formulación del producto utilizado (AMID THIN: ANA AMIDA 8,4% p/p) contiene ANA en forma de impurezas en su formulación, y en segundo lugar, porque la NAD se hidroliza en la planta produciendo ANA. En el presente estudio no se ha evaluado la importancia de las dos fracciones en el contenido final (trazas) de ANA, antes de su aplicación.
También se manifiesta la importancia del tamaño de los frutos que componen las muestras, mostrando los frutos de diámetros pequeños contenidos significativamente superiores de las substancias estudiadas que los frutos de mayor tamaño. La mayor concentración inicial de y ácido naftilacético en los frutos pequeños se podría explicar, en parte, en base a la hipótesis derivada de la forma de aplicación del producto, mediante pulverización, de modo que la deposición de producto sobre el fruto es, muy aproximadamente, proporcional a la superficie del propio fruto; con lo que se explicaría la relación encontrada entre concentración inicial de y ácido naftilacético en el fruto y la concentración de la misma en la superficie del fruto, supuesto esférico (p< 0,001, R2=0,83).
Otros factores, como la absorción de la sustancia por parte del fruto según su tamaño puede ser un factor influyente en estos estados de desarrollo, aunque no se ha estudiado en el presente trabajo.
Tal y como se muestra en la Figura 2, y para todas las variedades, el contenido de residuos fue disminuyendo a partir del momento de aplicación siguiendo un patrón similar de degradación (WASFY et al. 1973; VIJAYARAGHAVAN y PENGELLY, 1986) no discutido en el presente trabajo, y prácticamente independiente de la concentración inicial existente, de modo que a partir de los 56 días de la aplicación de naftilacetamida y de los 21 días en el caso del ácido naftilacético los contenidos se hallan, con una alta probabilidad, por debajo del límite de detección.
Conclusiones
Los residuos generados por la aplicación de los productos ANA y NAD se degradan, dentro del periodo de crecimiento del fruto, hasta los límites de detección que alcanzan los métodos de análisis utilizados que para el presente ensayo han sido de 10-9, es decir, ppb o ng/g.
En cualquier caso, las concentraciones de ambas materias presentes en los frutos a los 21 días para el ANA y 61 días para el NAD, en las condiciones del ensayo, pueden considerase cuantitativamente insignificantes (por debajo de 1 ppb) y, por tanto, en base al presente estudio, todo parece apuntar que se pueden usar estos productos para el aclareo en manzano sin riesgo alguno para el consumidor y el medio ambiente.
En el caso del ANA, la presencia sistemática de mayores concentraciones en los frutos pequeños sugiere la posibilidad que su acción dependa de la cantidad de producto inicial sobre el fruto sea más acentuada en estos frutos frente a los más grandes; apuntando los resultados que ello puede ser debido a la forma de distribución del producto, sensiblemente uniforme respecto la superficie, que favorece una mayor concentración en los tejidos de los frutos pequeños, al tener estos una relación superficie/volumen mayor.
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