El desarrollo de sustancias biofortificantes en la protección de cultivos que inducen respuestas defensivas, preventivas e incluso curativas constituye en estos momentos una práctica agrícola muy común. Por ello, el objetivo de este estudio fue comparar la respuesta fisiológica en lechuga y naranjo tras la aplicación de Fosetyl Aluminio (FA) y el bioestimulante activador de las defensas naturales de la planta, EUROFIT Max (E. Max). Se realizó una dinámica del intercambio gaseoso para determinar también la eficiencia en el uso del agua (EUA), así como medidas de expresión de poliaminas libres (PAL) constitutivas en todas las variantes estudiadas. Los principales resultados evidenciaron que la aplicación de E. Max aumenta los niveles de actividad fotosintética (Fn) de la planta y también de EUA, en relación con el tratamiento con FA e incluso con el tratamiento control. La evaluación de poliaminas libres en plantas tratadas con E.Max puso de manifiesto que las plantas con este tratamiento presentaban un estado de senescencia menos avanzado que las procedentes del tratamiento con FA, en ambas especies estudiadas.
INTRODUCCIÓN
La aplicación de materias activas como el Fosetyl Aluminio (FA), constituye una práctica fitosanitaria común en una amplia variedad de cultivos hortícolas, frutales, uvas y ornamentales, debido a que tiene propiedades curativas y preventivas contra ciertos tipos de enfermedades criptogámicas causadas por hongos y bacterias (PAULIN et al., 1990).
Actualmente la aplicación de activadores para las defensas naturales de la planta, se emplea contra enfermedades originadas por la infección de Phytophthora spp.
Se ha demostrado que la expresión del sistema defensivo de las plantas está afectado por algunas hormonas vegetales y moléculas con actividad fitorreguladora (OHASHI and OHASIMA, 1992; GOICOECHEA et al., 2004) y también puede estimularse por la influencia de ciertos nutrientes (REUVENI et REUVENI, 1998). En consecuencia, nuevas estrategias que integren la actividad de estas moléculas con la acción específica de nutrientes minerales en el control de ciertas enfermedades pueden ser efectivas.
En este sentido EUROFIT Max (E. Max) bioestimula las defensas naturales de las plantas frente al ataque de patógenos, lo que constituye un claro ejemplo de este tipo de estrategias. Este producto está formulado en base a un complejo orgánico elicitor formado por una familia de oligosacáridos de origen vegetal, un complejo orgánico señal que contiene una proporción de citoquininas, auxinas y poliaminas y un complejo mineral formado, a su vez, por hierro acomplejado, zinc, manganeso y fósforo inorgánico en forma de Fosfoetanolato (GARCÍA-MINAet al., 1999).
Se han encontrado efectos positivos con E. Max contra Bremia lactucae en lechuga y contra Phytophthora en naranjos (FERRARI y GARCÍA-MINA, 2004).
El objetivo de este trabajo consistió en estudiar el papel E. Max y FA sobre el comportamiento fisiológico en dos cultivos diferentes, lechuga y naranjo.
Material y métodos
Ensayo 1. Aplicación de E. Max y FA en lechuga
Sitio experimental y diseño de riego. El ensayo se realizó en la finca experimental del Centro de Edafología y Biología Aplicada del Segura (CEBAS- CSIC), en la localidad de Santomera, Murcia.
La variedad ensayada es Lucerna, tipo romana. El sistema de riego fue por goteo, con una frecuencia de aplicación de agua en días alternos y durante 15 minutos, colocando un emisor por planta que arrojaba un caudal de 2 L H-1. La duración del ensayo fue de 60 días.
Tratamientos y dosis. Se evaluaron los efectos fisiológicos de E. Max, FA, y control no tratado, sobre el desarrollo de plantas de lechuga en un diseño completamente aleatorio con 3 tratamientos, cada uno con 12 plantas. Una semana antes de la finalización del ensayo, las plantas fueron pulverizadas con ambos productos a la dosis de 2.5 cm3 y 2.5 g por litro de agua de E. Max y FA, respectivamente.
Medidas de intercambio gaseoso y eficiencia en el uso del agua. Se midieron los parámetrosde intercambio gaseoso (fotosíntesis neta (Fn) yconductancia estomática (gs)) en 3 plantas por cadatratamiento, utilizando el LICOR LI-6400 PortablePhotosynthesis System. Todas las medidas se realizarona mediodía solar y una semana después dela aplicación de los productos. La eficiencia en eluso del agua (EUA) se determinó por el cocienteFn/gs (EGILLA et al., 2005).
Medidas de los niveles de poliaminas libres (PAL). Se midieron las poliaminas libres enel tejido foliar según la metodología de dansilación(Houdusse et al., 2005). La fase orgánica fue separaday secada con un vortex evaporador (LabconcoInstruments, Kansas City, MO). Para el análisis deHPLC se uso una Bomba Water 616 (Water 717 PlusAutosampers, Milford, MA) con una columna Hipersyl3 ODS equilibrada con una mezcla metanol: aguaa diferentes tiempos a 30oC. Las Dansil poliaminasfueron detectadas con un espectrofotómetro de fluorescenciacon la longitud de onda de excitacióny emisión de 350 y 515 nm, respectivamente. Lacuantificación fue llevada a cabo a través de curvaspatrones estándar de Putrescina, (Put), Espermidina(Epd) y Espermina (Epm). Se realizaron las medidasen 6 plantas por tratamiento al final del períodoexperimental.
Ensayo 2. Aplicación de E. Max y FA en naranjo
Sitio experimental y diseño de riego. Este ensayo se realizó en una finca comercial ubicada en Fuente Librilla (Murcia), sobre una plantación de naranjos adultos de la variedad Navelate sobre patrón Citrus macrophylla, cultivados a marco de plantación de 6x4. El sistema de riego es por goteo, disponiendo cada árbol de 3 goteros autocompensantes de 4 L H-1, separados a 1 m. Es de resaltar que no acontecieron episodios de lluvia durante el período experimental (15 días).
Tratamientos y dosis. Se dispusieron 3 tratamientos: un tratamiento con E. Max, otro con FA y un control no tratado. La dosis empleada en pulverización foliar de ambos productos fue de 2.5 cm3 y 2.5 g por litro de agua de E. Max y FA, respectivamente.
Medidas de intercambio gaseoso y eficiencia en el uso del agua. Se midieron los parámetrosde intercambio gaseoso (fotosíntesis neta (Fn)y conductancia estomática, (gs)) en 3 plantas portratamiento, una semana después de la aplicación de ambos productos utilizando el LICOR LI 6400 Portable Photosynthesis System. Todas las medidas se realizaron a mediodía solar. La eficiencia en el uso del agua (EUA) de las plantas se determinó de forma similar a la descrita en el ensayo 1.
Medidas de los niveles de poliaminas libres (PAL). Se midieron las poliaminas libres en el tejidofoliar según la metodología descrita en el ensayo 1.
Se evaluaron 3 plantas por tratamiento al final del período experimental, realizándose 3 repeticiones por planta para cada tratamiento.
Resultados y discusión
Ensayo 1. Aplicación de E. Max y FA en lechuga
En la Tabla 1 se presentan los valores de fotosíntesis neta (Fn), conductancia estomática (gs), y eficiencia en el uso del agua (EUA), en presencia de la aplicación de los productos, E. Max y FA.
En el caso de E. Max se encontró un aumento significativo en la actividad fotosintética de la planta, en relación con las plantas procedentes del tratamiento FA.
Los niveles de conductancia estomática (gs) fueron significativamente menores para los casos de E. Max y control lo que se tradujo en una mayor eficiencia en el uso del agua (EUA).
Estos resultados ponen de manifiesto un mejor estado funcional de la planta en caso de situaciones de estrés con E. Max.
En la Tabla 2 se presentan los valores de poliaminas libres (PAL). En este caso sólo se estudiaron estas sustancias para los tratamientos en donde se aplicaron los productos a comparar.
De forma general la aplicación de E. Max provocó una significativa disminución de los contenidos de las PAL en las plantas tratadas, al contrario de lo ocurrido en presencia del FA, con valores superiores en las sustancias Putrescina y Espermidina.
La mayor presencia de este tipo de sustancias es una característica de plantas que sufren condiciones de estrés de tipo biótico o abiótico, como ha sido demostrado por distintos autores (PARADI et al., 2003; Santa Cruz et al., 1997). En este sentido, numerosos estudios sugieren que la capacidad de las plantas en convertir Put en Epd y Epm está estrechamente relacionada con la posibilidad de las mismas en desarrollarse bajo condiciones de estrés (BOUCHEREAUet al., 1999).
Ensayo 2. Aplicación de E. Max y FA en naranjo
En la Tabla 3 se presentan los valores de fotosíntesis neta (Fn), conductancia estomática (gs), y eficiencia en el uso del agua (EUA), en presencia de la aplicación de los productos, E. Max y FA.
Los resultados mostraron que el tratamiento con E. Max presentó un significativo aumento de los niveles de Fn, los cuales fueron un 55% y un 12% mayores con respecto al tratamiento FA y control, respectivamente.
El calculo de la eficiencia en el uso del agua (EUA), puso de manifiesto que la aplicación de E. Max aumentó dicho parámetro de forma significativa en un 11% y un 30% respecto a FA y control, con valores de conductancia estomática (gs) similares al control, lo que pone de manifiesto un mejor estado funcional de la planta en caso de situaciones de estrés con E. Max.
Numerosos estudios, ponen de manifiesto el papel de las poliaminas en la fisiología de las plantas en relación con la respuesta de éstas al estrés abiótico, especialmente los incrementos de los niveles de putrescina (GALSTON y SAWHNEY, 1990; SLOCUM y FLORES, 1991; TIBURCIO et al., 1997), aunque las poliaminas poseerían distintos roles fisiológicos (BOUCHEREAU et al., 1999).
Al respecto, recientemente se ha demostrado que la acumulación de poliaminas superiores está relacionada con el estrés salino prolongado (MAIALEet al., 2004; SÁNCHEZ et al., 2005). Por su parte, los estreses que conducen a un incremento en los niveles de putrescina también incluyen, entre otros, la infección por patógenos (TORRIGIANI et al., 1997).
En la Tabla 4 se presentan los valores de poliaminas libres (PAL).
En el caso de los niveles de PAL, hay que destacar el efecto que tuvo E. Max sobre el ratio (Epd + Epm): Put, ya que éste se incrementó en un 20% y 30% con respecto a las plantas tratadas con FA y control, respectivamente.
Conclusiones
Lechuga
? La aplicación de E. Max mostró, un aumento de los niveles de actividad fotosintética de la planta y la eficiencia del uso del agua en relación con FA.
? Los menores valores de PAL fueron detectados en las plantas tratadas con E. Max, indicativo de un estado de senescencia menos avanzado que las procedentes del tratamiento con FA.
Naranjo
? El tratamiento con E. Max presentó los mayores niveles de fotosíntesis neta. Los valores de eficiencia del uso del agua mostraron que el tratamiento con E. Max presentó incrementos significativos del orden de 11% y 30% respecto a FA y control.
? Para el caso de los niveles de PAL, la aplicación de E. Max incrementó el ratio (Epd + Epm): Put en un 20% y 30% respecto del obtenido para plantas tratadas con FA y control, respectivamente, indicativo de la adaptación de las mismas en desarrollarse bajo condiciones de estrés.
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